分子实验
Molecular experiments
一、血液
1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3、组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清。
二、动物组织
取下合适组织样本后用预冷的PBS或者生理盐水漂洗,尽量除尽残留血液,用滤纸把多余PBS吸取干净,把组织分成约100mg大小(依据实验目的需要进行调整),用冻存管装好,于-80℃或者液氮中保存,干冰运输。
三、细胞
1、悬浮细胞
把细胞及培养液一起收集到15mL离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清,加入PBS清洗细胞去除培养基残留,1500rpm离心3min,弃去上清,于-80℃或者液氮冻存待用。
2、贴壁细胞
弃去细胞培养基,加入胰酶消化后,1500rpm离心3min,弃去上清,于-80℃或者液氮冻存待用。
3、细胞刮刀收集细胞
某些蛋白(即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测),直接用细胞刮刀刮下细胞。
(1)将刮下的细胞收集到离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;
(2)加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;
(3)反复3次,弃去上清后,于-80℃或者液氮冻存待用。
注意:
1、提取胞浆、胞核蛋白的样本应尽量采用新鲜样本,冻存样本提取的胞核蛋白可能会减少;
2、样本保存在-80℃或液氮也要避免反复冻融,建议尽快检测;
3、长距离运送样本时采用干冰或者液氮。
温馨提示:
1、向中科赛恩斯(以下简称“我司”)寄送样本或试剂等请先与项目专员进行沟通,约定好时间后再进行寄送。
2、未沟通或未经项目专员同意寄送的样本,出现任何问题,我司均不承担责任。
3、寄送样本请提前检查标识是否清楚,并尽可能在快递中附样本明细。即:样本编号、样本数量、样本类型等详细信息;以保证样本尽快被接收并良好储存,无人认领样本,我司将会予以清除处理。
4、在无特殊情况下,我司不接收邮费到付的样本。